柚皮素是一種二氫黃酮類化合物，廣泛存在于 蕓香科植物中，具有抗病毒、抗氧化、抗炎、鎮(zhèn) 咳、抗腫瘤、抗纖維化、預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化等多種 藥理活性，顯示出巨大的潛在利用價(jià)值，但其 溶解度不理想，導(dǎo)致體內(nèi)吸收較差，口服后藥 效大打折扣。

1 材料

Agilent 1260 型高效液相色譜儀 ( 配置 DAD 檢 測(cè)器，美 國(guó) Agilent 公 司) ; AＲ2140 型 電 子 天 平 ［梅 特 勒-托 利 多 儀 器 ( 上 海) 有 限 公 司］; DF101S 型集熱式恒溫加熱磁力攪拌器 ( 鄭州長(zhǎng)城科 工貿(mào)有限公司) ; VOＲTEX-5 型渦旋混合器 ( 海門市其林貝爾儀器制造有限公司) ; ATS 型均質(zhì)機(jī) ( 加拿大 Seeker 公司) ; ＲE5299 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 ( 上海亞榮生化儀器廠) ; MD200-2 型氮?dú)獯祾邇x ( 杭 州奧威儀器有限公司) ; Master-sizer 型粒度分析儀 ( 英國(guó)馬爾文儀器有限公司) 。 柚 皮 素 原 料 藥 ( 批 號(hào) 20170223， 含 有 量 98. 7%，西安瑞迪生物科技有限公司) ; 柚皮素對(duì) 照品 ( 批號(hào) Y-034-181217，成都瑞芬思生物科技 有限公司) ; 卵磷脂 ( 批號(hào) PC-98T，輔必成上海醫(yī) 藥科技有 限 公 司) ; 聚乙烯吡咯烷酮 K30 ( PVPK30，批號(hào) 25000240379，亞什蘭集團(tuán)公司) ; 肝素 鈉 ( 批號(hào) 20160511S，新泰市朝陽(yáng)生化研究所) 。 清潔級(jí) SD 大鼠，雌雄兼用，體質(zhì)量 ( 300 ± 20) g，河南省動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，動(dòng) 物 許 可 證 號(hào) SCXK ( 豫) 2016-0001。

2 方法與結(jié)果

BDS-C18 色 譜 柱 ( 250 mm×4. 6 mm，5 μm) ; 流動(dòng)相甲醇-水 ( 65 ∶ 35) ; 體積流量 1. 0 mL /min; 柱溫 30 ℃ ; 檢測(cè)波 長(zhǎng)287 nm; 進(jìn)樣量 20 μL精密量取納米混懸液 0. 5 mL，加入 10 mL 甲醇超聲 5 min，即得。測(cè)得柚皮素峰面積 ＲSD 為 0. 64%，表明溶液在 48 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。取 1. 0、100. 0、200. 0 μg /mL 對(duì)照 品溶液，連 續(xù) 6 d，測(cè)得日內(nèi)精密度 ＲSD 均小于 0. 52%，日間 精密度 ＲSD 均小于 1. 33%，表明該方法精密度良 好。平行制備 6 份供試品溶液，測(cè)得柚皮素峰面積 ＲSD 為 1. 39%， 表明該方法重復(fù)性良好?？瞻准{米混懸液分別配制成 40、60、80 μg /mL，測(cè)得柚皮素平均加樣回收率為 99. 36%，ＲSD小于 1. 80%。取對(duì)照品溶液逐步稀釋，測(cè)得檢測(cè)限為 0. 5 ng /mL，定量限為 1. 2 ng /mL。在制備溫度 25 ℃、均質(zhì) 壓力 60 MPa、均質(zhì)次數(shù) 10 次的條件下，考察 PVP K30、卵磷脂、兩者混合物 ( 1 ∶ 1) 對(duì)納米粒粒徑 的影響。結(jié)果，平均粒徑分別為 ( 281. 42±5. 93) 、 ( 224. 79 ± 6. 07 ) 、( 182. 50 ± 4. 11 ) nm，故 選 擇 PVP K30-卵磷脂混合物 ( 1 ∶ 1) 作為表面活性劑。在表面活性劑 PVP K30-卵磷脂 ( 1 ∶ 1) 、制備溫度 0 ℃、均質(zhì)次數(shù)為 10 次的條件 下，考察均質(zhì)壓力 40、60、80、100 MPa 對(duì)納米粒 粒徑的影響。在均質(zhì)壓力 40 ～ 80 MPa 范圍內(nèi)粒徑逐漸變小，但 增 大 至 100 MPa時(shí) 反 而 上 升，故 選 擇 80 MPa 作 為 均 質(zhì) 壓力。

3 討論

在制備納米混懸劑過(guò)程中，有機(jī)溶劑與水互溶 程度越高，攪拌條件下兩相混合時(shí)擴(kuò)散越快，越有 利于小粒徑納米粒快速形成，綜合考慮溶解度、毒 性等因 素，選擇無(wú)水乙醇作為制備溶劑。據(jù)報(bào)道，沉淀法制備納米粒是放熱過(guò)程，溫度較高 時(shí)會(huì)增加納米粒子之間碰撞機(jī)會(huì)，容易出現(xiàn)晶體成 長(zhǎng)和納米粒聚集，故較低的制備溫度有助于獲得粒 徑、PDI 均較小另外，制備時(shí)需加入一定量表面活性劑，通過(guò) 吸附于藥物粒子表面來(lái)提供電荷排斥作用或立體位 阻作用，從而防止納米粒聚集，提高穩(wěn)定性。前期 預(yù)實(shí)驗(yàn)對(duì)泊洛沙姆 188、聚山梨酯 80、聚乙烯醇等 進(jìn)行了篩選，發(fā)現(xiàn)所得納米粒粒徑均較大，其原因 可能是這些表面活性劑不能吸附于納米粒表面，無(wú) 法提供電荷排斥作用或立體位阻作用。由于表 面活性劑聯(lián)合應(yīng)用可提高納米粒長(zhǎng)期穩(wěn)定性， 故實(shí)驗(yàn)選擇 PVP K30-卵磷脂 ( 1 ∶ 1) ，此時(shí)所制備 的納米粒粒徑較小。



 

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